Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSPC1: sc-401728-ACT

PSPC1 (paraspeckle component 1) est une protéine liant l’ARN et un élément structural central des paraspeckles nucléaires, qui coordonne la régulation de l’expression génique aux niveaux transcriptionnel et post-transcriptionnel. Via des interactions avec des ARN longs non codants tels que NEAT1 et avec d’autres membres de la famille DBHS, PSPC1 contribue à organiser des complexes ribonucléoprotéiques qui influencent la maturation des ARN, leur rétention dans le noyau et des programmes d’expression génique répondant au stress. L’activité de PSPC1 s’inscrit à l’interface de la régulation de la chromatine et des voies du métabolisme de l’ARN, qui façonnent les transitions d’état cellulaire et les réponses adaptatives. Une biologie des paraspeckles dérégulée et une expression altérée de PSPC1 ont été associées à des phénotypes pertinents pour le cancer ainsi qu’à d’autres situations où les réseaux de régulation de l’ARN sont perturbés, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques.

PSPC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSPC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSPC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSPC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSPC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSPC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSPC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSPC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSPC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSPC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.