Particules Lentivirales d'Activation (m) PSMD1: sc-427651-LAC

Psmd1 chez la souris code PSMD1 (Rpn2), une sous-unité essentielle non ATPasique de la particule régulatrice 19S du protéasome 26S, qui sert d’échafaudage pour l’assemblage et soutient la reconnaissance et le traitement des substrats lors de la protéolyse dépendante de l’ubiquitine. Via le système ubiquitine–protéasome, PSMD1 contribue au contrôle de la qualité des protéines, à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et à la régulation de voies de signalisation, notamment NF-κB, via le renouvellement d’IκB. La perturbation des composants régulateurs du protéasome peut déséquilibrer la protéostase, modifier des programmes transcriptionnels d’adaptation au stress et influencer le traitement des antigènes, reliant la biologie de PSMD1 à des mécanismes pertinents pour la neurodégénérescence, l’inflammation et la transformation oncogénique. Dans les modèles murins, la modulation de Psmd1 constitue une approche exploitable pour étudier l’architecture régulatrice du protéasome et les conséquences en aval sur l’homéostasie cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales PSMD1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Psmd1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PSMD1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Psmd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PSMD1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Psmd1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.