PSM Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401947-LAC

FOLH1 codifica l’antigene di membrana specifico della prostata (PSM), una metallopeptidasi transmembrana di tipo II dipendente dallo zinco, con attività di folato idrolasi e di NAALADasi, che regolano l’elaborazione extracellulare dei folati e la segnalazione glutamatergica. La proteina influenza l’assorbimento di nutrienti e il metabolismo dei neurotrasmettitori tramite la scissione dei folati poli-γ-glutammati e dell’N-acetilaspartilglutammato, collegandola alla disponibilità di amminoacidi e all’omeostasi sinaptica. L’espressione di FOLH1 è fortemente arricchita nell’epitelio prostatico ed è ampiamente utilizzata come marcatore molecolare negli studi di biologia prostatica, mentre la sua attività enzimatica nei tessuti neurali supporta ricerche sulla neurotrasmissione eccitatoria e sui processi neuroinfiammatori. Un’alterata espressione e attività di FOLH1/PSM è stata associata alla biologia del carcinoma prostatico e a vie rilevanti per la neurodegenerazione e per il rimodellamento del microambiente associato ai tumori.

Le particelle di attivazione lentivirale PSM (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FOLH1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PSM (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FOLH1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PSM. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FOLH1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.