PSF Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402024-NIC

SFPQ codifica a proteína do fator de splicing rica em prolina e glutamina (PSF), um fator nuclear multifuncional de ligação a RNA e DNA que acopla a transcrição ao splicing de pré-mRNA, ao processamento da extremidade 3′ e à retenção nuclear de RNA. A PSF participa da montagem e da regulação de paraspeckles por meio de interações com o lncRNA NEAT1 e com proteínas relacionadas da família DBHS, influenciando programas de expressão gênica durante respostas ao estresse. Além do metabolismo de RNA, a PSF contribui para a manutenção do genoma ao modular o reparo de quebras de dupla fita no DNA e processos associados à replicação por meio de interações proteína–proteína em sítios de dano. A desregulação ou a alteração de localização de SFPQ tem sido associada a splicing aberrante e a controle transcricional anômalo observados no câncer e na neurodegeneração, tornando-o um ponto útil para estudar mecanismos de doença dependentes de processamento de RNA em células humanas.

PSF O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SFPQ em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SFPQ. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SFPQ. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SFPQ interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.