PSF Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402024-ACT

O SFPQ humano codifica a proteína PSF, um fator nuclear multifuncional de ligação a RNA e DNA que coordena a regulação transcricional, o splicing de pré-mRNA e o processamento da extremidade 3′ do RNA. A PSF participa da dinâmica de paraspeckles e de corpos nucleares por meio de interações com RNAs longos não codificantes e parceiros de ligação a RNA, moldando programas de expressão gênica sob estímulos de estresse e de diferenciação. Também contribui para a manutenção do genoma ao influenciar a sinalização da resposta a danos no DNA e a escolha de vias de reparo, conectando o processamento de RNA a processos associados à cromatina. A desregulação de complexos ribonucleoproteicos associados a SFPQ/PSF tem sido relatada em contextos que envolvem alteração da fidelidade de splicing, instabilidade genômica e controle transcricional aberrante, frequentemente explorados em pesquisas sobre câncer e neurodegeneração.

PSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SFPQ sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSF O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SFPQ em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SFPQ, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSF. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SFPQ nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSF no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSF em células tumorais com expressão de SFPQ silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.