Protamine 1CRISPR激活质粒(h): sc-402496-ACT

PRM1 编码鱼精蛋白1（protamine 1），这是一种富含精氨酸的核蛋白，在精子发生后期（晚期精子形成期）取代组蛋白，从而在单倍体精子细胞中驱动染色质的高度压缩。这一转换是精子头部凝缩、基因组稳定以及父源 DNA 正确包装的关键环节，并与雄性生殖系中的染色质重塑、DNA 修复和表观遗传重编程等事件协同进行。研究显示，PRM1 表达异常或鱼精蛋白比例失衡与精子染色质结构异常、DNA 断裂增加以及精子功能受损有关，常见于男性因素不育相关研究。作为一种生殖细胞特异的染色质组分，PRM1 也常被用作标志物，用于解析精子成熟程序以及精子细胞特异性转录的调控。

Protamine 1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PRM1的表达。

Protamine 1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PRM1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PRM1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Protamine 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PRM1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Protamine 1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PRM1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Protamine 1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。