Plasmide CRISPR d'Activation (h) Protamine 1: sc-402496-ACT

PRM1 code la protamine 1, une protéine nucléaire hautement riche en arginine qui remplace les histones lors de la spermiogenèse tardive afin de provoquer une compaction extrême de la chromatine dans les spermatides haploïdes. Cette transition est essentielle à la condensation de la tête du spermatozoïde, à la stabilisation du génome et au conditionnement adéquat de l’ADN paternel ; elle est coordonnée avec des événements de remodelage de la chromatine, de réparation de l’ADN et de reprogrammation épigénétique dans la lignée germinale mâle. Une expression altérée de PRM1 ou un déséquilibre des protamines est associé, dans des études sur l’infertilité masculine, à une structure anormale de la chromatine spermatique, à une augmentation de la fragmentation de l’ADN et à une altération de la fonction des spermatozoïdes. En tant que composant de la chromatine restreint aux cellules germinales, PRM1 est également utilisé comme marqueur pour étudier les programmes de maturation des spermatozoïdes et la régulation de la transcription spécifique des spermatides.

Protamine 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Protamine 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Protamine 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Protamine 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Protamine 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.