proglucagon Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416721-ACT

O GCG humano codifica o proglucagon, um pró-hormônio processado de forma específica conforme o tecido, gerando glucagon em células α pancreáticas e peptídeos incretínicos como GLP‑1 e GLP‑2 em células L intestinais e em determinados neurônios. Esses peptídeos coordenam o equilíbrio energético sistêmico ao regular a produção hepática de glicose, a secreção de insulina, a sinalização do apetite e o crescimento intestinal, conectando o GCG à homeostase endócrina e metabólica. Os hormônios derivados do proglucagon sinalizam principalmente por vias de GPCR que ativam cAMP/PKA e programas transcricionais dependentes de CREB, integrando a detecção de nutrientes com respostas hormonais. O processamento ou a sinalização do proglucagon desregulados estão associados a comprometimento do controle glicêmico e a fenótipos mais amplos de doenças metabólicas, tornando o GCG um ponto central para estudar a biologia das ilhotas e os eixos endócrinos intestino–pâncreas.

proglucagon O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GCG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

proglucagon O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GCG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GCG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de proglucagon. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GCG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de proglucagon no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via proglucagon em células tumorais com expressão de GCG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.