Progesterone Receptor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400198-ACT

PGR codifica o receptor humano de progesterona, um receptor nuclear de hormônio ativado por ligante que atua como fator de transcrição para coordenar programas gênicos dependentes de progesterona. Após a ligação do hormônio, o PGR regula a acessibilidade da cromatina e redes transcricionais que governam o desenvolvimento de tecidos reprodutivos, a progressão do ciclo celular, a diferenciação e a sinalização inflamatória, por meio de interações com co-reguladores de receptores esteroides e com as vias MAPK/PI3K. A atividade específica de isoformas (PR-A e PR-B) molda respostas dependentes do contexto em endométrio, mama e ovário, influenciando a comunicação epitélio–estroma e a responsividade hormonal. A desregulação da sinalização do PGR e alterações na expressão do receptor são frequentemente estudadas em cânceres hormônio-responsivos e em distúrbios reprodutivos, nos quais afetam a proliferação, a invasão e mecanismos de resistência endócrina.

Progesterone Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PGR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Progesterone Receptor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PGR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PGR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Progesterone Receptor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PGR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Progesterone Receptor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Progesterone Receptor em células tumorais com expressão de PGR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.