Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRODH2 (h2): sc-405889-KO-2

Présentation

PRODH2 code une oxydoréductase mitochondriale flavino-dépendante qui participe au catabolisme de la proline et de l’hydroxyproline, reliant le renouvellement des acides aminés à l’équilibre rédox cellulaire et au métabolisme énergétique. En couplant des réactions de transfert d’électrons à la chaîne respiratoire, l’activité de PRODH2 peut influencer l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et l’adaptation métabolique en situation de stress. Une dérégulation du métabolisme de la proline a été associée à des altérations de la fonction mitochondriale et de la signalisation rédox observées dans divers phénotypes neurodéveloppementaux et métaboliques. Ainsi, PRODH2 est étudié dans des voies reliant le métabolisme mitochondrial, l’utilisation des acides aminés et les réponses au stress oxydant.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRODH2 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PRODH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PRODH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PRODH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRODH2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PRODH2 pour l'étude de la signalisation de PRODH2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PRODH2 essentiels à la fonction de PRODH2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PRODH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRODH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRODH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PRODH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRODH2 plasmide HDR (h) et le PRODH2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PRODH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PRODH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.