PRELI CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411975-ACT

ヒトのPRELID1は、ミトコンドリア膜間腔に存在するタンパク質PRELIをコードしており、ミトコンドリアのリン脂質恒常性および内膜の完全性の維持に関与するとされています。PRELIは、PRELI様脂質輸送経路の中で機能し、カルジオリピンに関連する膜構造の組織化、酸化的リン酸化の効率、ならびにアポトーシスやストレス適応に影響するミトコンドリア動態を支えます。脂質の取り扱いと呼吸鎖の機能を結び付けることで、PRELIは細胞のエネルギー代謝とレドックスバランスに寄与します。PRELID1の制御異常に伴うミトコンドリア脂質組成の変化やバイオエネルギー・ストレスシグナルは、がん生物学や神経変性に関連する表現型に広く見られるミトコンドリア機能障害の機序研究において重要です。

PRELI CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRELID1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRELI CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRELID1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRELID1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRELIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRELID1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRELI依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRELID1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRELI経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。