PP2A-B55-δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404806-ACT

PPP2R2D codifica a subunidade regulatória B55δ da proteína fosfatase 2A (PP2A), uma importante fosfatase de Ser/Thr que ajusta a saída de sinalização ao direcionar a atividade catalítica da PP2A para substratos específicos. A PP2A-B55δ contribui para o controle da progressão do ciclo celular e da recuperação de checkpoints ao regular a dinâmica de fosforilação na saída da mitose e em outras transições dependentes de fosforilação, com efeitos a jusante sobre a proliferação e as respostas ao estresse. Por meio da integração com vias acionadas por quinases, incluindo redes ligadas à sinalização MAPK e PI3K/AKT, alterações na expressão de PPP2R2D ou no equilíbrio do complexo PP2A-B55δ podem remodelar os estados do fosfoproteoma. A desregulação da composição do holoenzima PP2A é frequentemente estudada na biologia do câncer e na neurobiologia como um mecanismo que influencia a estabilidade genômica, a diferenciação e a sinalização neuronal.

PP2A-B55-δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PPP2R2D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PP2A-B55-δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PPP2R2D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PPP2R2D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PP2A-B55-δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PPP2R2D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PP2A-B55-δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PP2A-B55-δ em células tumorais com expressão de PPP2R2D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.