POLR3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406739
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- POLR3B O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico POLR3B, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:POLR3B Anticorpo (G-6): sc-515362
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
POLR3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406739 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
POLR3B codifica a segunda maior subunidade da RNA polimerase III, uma enzima multisubunitária responsável pela transcrição de pequenos RNAs não codificantes, incluindo tRNAs, rRNA 5S e outros RNAs curtos necessários para a tradução e o crescimento celular. Por meio da regulação da produção da Pol III, o POLR3B influencia a biogênese de ribossomos, a proteostase e a adaptação metabólica, integrando a sinalização responsiva a nutrientes e ao estresse com a capacidade biossintética. A perturbação da transcrição pela Pol III afeta o reconhecimento imunológico inato de ácidos nucleicos citosólicos e a homeostase transcricional de forma mais ampla, tanto em estados celulares proliferativos quanto diferenciados. Variantes patogênicas em POLR3B estão associadas a distúrbios do espectro de leucodistrofias relacionadas à Pol III e a fenótipos de neurodesenvolvimento, tornando-o um gene-chave para o estudo da disfunção da maquinaria transcricional em células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO POLR3B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene POLR3B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do POLR3B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do POLR3B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína POLR3B.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de POLR3B para a investigação da sinalização de POLR3B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) POLR3B críticos para a função POLR3B
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos POLR3B para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo POLR3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo POLR3B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus POLR3B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo POLR3B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR POLR3B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia POLR3B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo POLR3B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.