Podocin CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-400930

개요

NPHS2는 사람 족세포(podocyte)에서 사구체 여과장벽의 슬릿 다이아프램(slit diaphragm)에 필수적인 단백질인 포도신(podocin)을 암호화하며, 신호전달 복합체가 이 부위에 자리 잡도록 하는 스캐폴드 역할을 합니다. 포도신은 네프린(nephrin)과 CD2AP와 상호작용하고 지질 뗏목(lipid raft) 미세영역의 조직화를 돕는 것으로, 이를 통해 세포골격 역학, 기계감지(mechanosensing), 그리고 발돌기(foot process) 구조의 유지가 뒷받침됩니다. NPHS2가 교란되면 슬릿 다이아프램의 무결성이 손상되고, 액틴 재구성과 세포 생존에 연관된 족세포 신호전달 경로가 변화합니다. 포도신의 유전적·기능적 결함은 스테로이드 저항성 신증후군과 국소 분절성 사구체경화증을 포함한 단백뇨성 신장질환과 강하게 연관되어 있어, NPHS2는 사구체 장벽 기능장애를 모델링하기 위한 핵심 표적입니다.

Podocin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 NPHS2 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 NPHS2 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 NPHS2의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Podocin 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Podocin 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 NPHS2 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Podocin 기능에 중요한 NPHS2 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 NPHS2 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Podocin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Podocin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 NPHS2 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Podocin HDR 플라스미드 (h) 및 Podocin HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 NPHS2 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 NPHS2 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.