PNGase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425553

概要

マウスNgly1は、ペプチド：N-グリカナーゼ（PNGase）をコードしており、小胞体から逆行輸送されたミスフォールド糖タンパク質からN結合型糖鎖を除去する、細胞質の脱糖鎖化酵素です。この活性は小胞体関連分解（ERAD）に不可欠で、脱糖鎖化をユビキチン—プロテアソームによる分解と結び付け、アンフォールドタンパク質応答（UPR）ストレス下のプロテオスタシスを形成します。NGLY1はNRF1/NFE2L1のプロセシング制御にも関与し、脱糖鎖化を、プロテアソーム遺伝子発現やストレス耐性を制御する細胞適応プログラムと連結します。N-グリカナーゼ機能の破綻は、プロテオトキシックストレス、タンパク質品質管理、ならびにNGLY1関連生物学で観察される神経発達表現型の機序に広く関係します。

PNGase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNgly1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ngly1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ngly1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PNGaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PNGaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ngly1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PNGaseの機能に不可欠なNgly1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ngly1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PNGase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPNGase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ngly1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PNGase HDRプラスミド（m）および PNGase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNgly1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNgly1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。