Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PMP22 Plasmide Double Nickase (m): sc-422323-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMP22 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMP22 Double Nickase Plasmid (m) e il PMP22 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pmp22. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PMP22 Antibody (G-6): sc-515199
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMP22 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422323-NIC | 20 µg | $410.00 |
La proteina mielinica periferica 22 (PMP22), codificata dal gene murino *Pmp22*, è una glicoproteina di membrana tetraspan altamente arricchita nelle cellule di Schwann e nella mielina compatta, dove contribuisce a regolare la composizione e la stabilità della membrana mielinica e la conduzione nei nervi periferici. PMP22 partecipa a vie di traffico di membrana e di proteostasi, inclusi il controllo di qualità del RE e il turnover endosomiale–lisosomiale, collegando la sua abbondanza all’omeostasi della mielina e ai programmi di differenziamento delle cellule di Schwann. Un dosaggio alterato di PMP22 o il suo misfolding è strettamente associato a fenotipi di neuropatia periferica, rendendo *Pmp22* un nodo chiave per studiare la mielinizzazione, le interazioni assone–glia e la segnalazione della risposta allo stress nel sistema nervoso periferico.
PMP22 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pmp22 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pmp22. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pmp22. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pmp22 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.