plexin-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401840

概要

PLXNB1は、クラス4セマフォリンの単回膜貫通型受容体であるプレキシンB1をコードし、細胞骨格の再構築と方向性のある細胞移動を協調的に制御します。プレキシンB1は、Rhoファミリー経路やRas関連の入力などを含む低分子量GTPアーゼのシグナル伝達モジュールと連動することで、アクチン動態、接着のターンオーバー、ならびに神経突起の誘導を調節します。さらに、受容体型チロシンキナーゼやインテグリン関連シグナルともクロストークし、さまざまな細胞環境における遊走および浸潤性の挙動に影響を与えます。PLXNB1の発現やシグナル伝達の異常は、神経発生過程や、運動性の変化・転移能などのがん関連表現型に関与することが示唆されており、経路研究における機構的ハブ（ノード）としての利用を支持しています。

plexin-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPLXNB1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PLXNB1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PLXNB1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、plexin-B1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、plexin-B1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PLXNB1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• plexin-B1の機能に不可欠なPLXNB1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PLXNB1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• plexin-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびplexin-B1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PLXNB1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  plexin-B1 HDRプラスミド（h）および plexin-B1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPLXNB1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPLXNB1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。