PLA2R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411636-ACT

PLA2R1はホスホリパーゼA2受容体（PLA2R）をコードしており、PLA2RはI型膜貫通型のC型レクチンファミリーに属する分子です。分泌型ホスホリパーゼA2酵素やその他のリガンドに結合し、それらの細胞内取り込み、局在、下流シグナル伝達を調節します。受容体介在性エンドサイトーシスや、細胞外における脂質メディエーターの利用可能性の調節を通じて、PLA2Rは炎症シグナル、酸化ストレス応答、細胞‐マトリックス相互作用に影響を与え得ます。腎生物学ではPLA2Rは足細胞に発現し、自己免疫性膜性腎症の文脈で広く研究されています。そこでは、PLA2Rに関連する免疫反応性や受容体ダイナミクスの変化が糸球体障害と関連づけられています。より広い観点では、PLA2R1は細胞生存、老化関連プログラム、組織リモデリングを司る経路においても検討されており、炎症に伴う表現型や線維化表現型との関連性が示唆されています。

PLA2R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLA2R1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PLA2R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLA2R1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLA2R1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PLA2Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLA2R1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPLA2R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLA2R1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPLA2R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。