Plasmide CRISPR/Cas9 KO PITHD1 (h): sc-412754
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- PITHD1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique PITHD1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PITHD1 Antibody (A-10): sc-515392
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO PITHD1 (h) | sc-412754 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
PITHD1 code une petite protéine conservée impliquée dans la protéostasie via des interactions avec le protéasome 26S, ce qui l’associe au renouvellement régulé des protéines et à l’adaptation au stress cellulaire. En modulant des processus liés au protéasome, PITHD1 peut influencer la stabilité de régulateurs de signalisation et du cycle cellulaire à courte durée de vie, qui façonnent les phénotypes de prolifération et de survie. Une expression altérée de PITHD1 a été rapportée dans des études multi-omiques dans plusieurs contextes tumoraux, ce qui appuie son utilisation comme cible de recherche pour disséquer les dépendances au système ubiquitine–protéasome. L’étude fonctionnelle de PITHD1 est donc pertinente pour les voies qui gouvernent le contrôle qualité des protéines, les réponses au stress et le remodelage du transcriptome/protéome.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PITHD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PITHD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PITHD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PITHD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PITHD1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PITHD1 pour l'étude de la signalisation de PITHD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de PITHD1 essentiels à la fonction de PITHD1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PITHD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le PITHD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PITHD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PITHD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le PITHD1 plasmide HDR (h) et le PITHD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PITHD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PITHD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.