Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-401671-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- Pit-1 CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 POU1F1 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 Pit-1 Antibody (G-2): sc-25258
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-401671-ACT | 20 µg | $397.00 |
인간 POU1F1은 뇌하수체 특이적 POU-홈도메인 전사인자 Pit-1을 암호화하며, 전엽 뇌하수체 계통(specification) 결정과 내분비 유전자 발현을 조절하는 핵심 조절자이다. Pit-1은 보존된 프로모터 및 인핸서 요소에 결합해 성장호르몬 분비세포(somatotroph), 프로락틴 분비세포(lactotroph), 갑상선자극호르몬 분비세포(thyrotroph)의 발달에 필요한 전사 프로그램을 제어하고, 공동조절인자와 크로마틴 리모델링 복합체와 협력하여 세포 정체성을 형성한다. 이 축은 GH1, PRL, TSHB를 포함한 주요 표적 유전자를 조절함으로써 뇌하수체 발달 신호와 호르몬 합성 경로를 통합한다. POU1F1의 조절 이상 또는 병적 변이는 뇌하수체 호르몬 결핍 및 선천성 뇌하수체기능저하증과 연관되며, Pit-1은 내분비 분화와 전사 네트워크 조절을 연구하는 데 널리 사용되는 모델이다.
Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 POU1F1 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
Pit-1 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 POU1F1 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 POU1F1 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 Pit-1 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 POU1F1 위치를 보존하고 내인성 위치에서 Pit-1 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 POU1F1 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 Pit-1 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.