PISD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404398
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PISD O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PISD, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PISD Anticorpo (H-2): sc-390070
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PISD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404398 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
PISD codifica a fosfatidilserina descarboxilase, uma enzima da membrana interna mitocondrial que converte fosfatidilserina em fosfatidiletanolamina, sustentando a biogênese de membranas, a arquitetura das cristas e a homeostase da organela. Ao controlar o pool de PE, o PISD influencia o remodelamento lipídico, a dinâmica mitocondrial e processos ligados à fosforilação oxidativa e à apoptose. A perturbação do metabolismo de fosfolipídios dependente de PISD tem sido associada a defeitos na função mitocondrial e a respostas mais amplas de estresse celular, tornando-o relevante para estudos de fenótipos neuromusculares e metabólicos. Seu papel central na biossíntese de lipídios mitocondriais também se cruza com vias que regulam a autofagia e o tráfego de lipídios entre RE e mitocôndrias.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PISD (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PISD em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PISD, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PISD na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PISD.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PISD para a investigação da sinalização de PISD, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PISD críticos para a função PISD
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PISD para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PISD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PISD Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PISD. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PISD Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PISD (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PISD para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PISD definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.