PIPK I α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403490

Panoramica

PIP5K1A codifica la fosfatidilinositolo-4-fosfato 5-chinasi di tipo I alfa (PIPK I α), una chinasi lipidica chiave che genera fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) a livello della membrana plasmatica e delle endomembrane. Controllando la disponibilità di PI(4,5)P2, PIPK I α regola il rimodellamento del citoscheletro di actina, l’endocitosi mediata da clatrina, la dinamica delle adesioni focali e l’accoppiamento della segnalazione recettoriale con vie a valle quali PLC e PI3K. La segnalazione dei fosfoinositidi dipendente da PIP5K1A influenza il traffico di membrana e la migrazione cellulare, processi spesso alterati nella biologia tumorale e nei fenotipi invasivi. Un’attività alterata di PIP5K1A è stata inoltre associata a una deregolazione della segnalazione dei fattori di crescita e delle risposte infiammatorie, a supporto della sua rilevanza in studi meccanicistici sul comportamento cellulare associato a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIP5K1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIP5K1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIP5K1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIPK I α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIP5K1A per lo studio della segnalazione di PIPK I α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PIP5K1A critici per la funzione di PIPK I α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIP5K1A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIPK I α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIP5K1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PIPK I α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIPK I α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIP5K1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIP5K1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.