PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403490

Visão geral

PIP5K1A codifica a fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinase tipo I alfa (PIPK I α), uma quinase lipídica fundamental que gera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) na membrana plasmática e em endomembranas. Ao controlar a disponibilidade de PI(4,5)P2, a PIPK I α regula a remodelação do citoesqueleto de actina, a endocitose mediada por clatrina, a dinâmica das adesões focais e o acoplamento da sinalização de receptores a vias a jusante como PLC e PI3K. A sinalização de fosfoinositídeos dependente de PIP5K1A influencia o tráfego de membranas e a migração celular, processos frequentemente alterados na biologia tumoral e em fenótipos invasivos. Alterações na atividade de PIP5K1A também foram associadas à desregulação da sinalização por fatores de crescimento e a respostas inflamatórias, reforçando sua relevância em estudos mecanísticos do comportamento celular associado a doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PIP5K1A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PIP5K1A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PIP5K1A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PIPK I α.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PIP5K1A para a investigação da sinalização de PIPK I α, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PIP5K1A críticos para a função PIPK I α
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PIP5K1A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PIPK I α Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PIP5K1A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PIPK I α Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PIPK I α (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PIP5K1A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PIP5K1A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.