PI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400541

概要

PIK3CBは、クラスIホスホイノシチド3-キナーゼ（PI3K）の触媒サブユニットであるp110βをコードしており、PIP2をリン酸化してPIP3を生成し、AKT–mTORをはじめとする下流のエフェクターノードへシグナルを伝達します。PI3K p110βは、受容体型チロシンキナーゼ（RTK）やGPCRによって開始されるシグナル伝達で重要な役割を担い、増殖、生存、代謝、細胞骨格ダイナミクス、ならびに小胞輸送を制御する多様な入力情報を統合します。ヒト細胞では、PI3K経路活性の変化が、がん化シグナル、治療抵抗性機構、異常な免疫・炎症応答としばしば関連しています。PIK3CBの機能はインスリン/IGFシグナルや細胞運動プログラムにも関与しており、経路マッピングや機能ゲノミクスで広く研究されている重要なノードです。

PI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPIK3CB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PIK3CB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PIK3CBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PI 3-kinase p110βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PI 3-kinase p110βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PIK3CB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PI 3-kinase p110βの機能に不可欠なPIK3CBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PIK3CBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPI 3-kinase p110β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PIK3CB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PI 3-kinase p110β HDRプラスミド（h）および PI 3-kinase p110β HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPIK3CBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPIK3CB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。