PHC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406576

概要

PHC3（polyhomeotic homolog 3）は、クロマチンの凝縮と、発生や細胞アイデンティティに関わる遺伝子の安定した転写サイレンシングに寄与する Polycomb 抑制複合体 1（PRC1）の中核構成因子です。Polycomb 依存的なエピジェネティック制御を介して、PHC3 はヒストンのユビキチン化に連動した抑制的クロマチン状態を形成し、系譜プログラムの維持や増殖制御に関与します。Polycomb 活性の変化や PRC1 に関連した抑制の破綻は、がん化に伴う転写プログラムや異常分化としばしば結び付けられるため、PHC3 は腫瘍生物学およびエピジェネティック制御の研究において重要な対象となります。また PHC3 の機能は、発生過程やストレス応答においてクロマチン制御因子がどのように遺伝子ネットワークを協調的に制御するかを理解するための指標としても用いられます。

PHC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPHC3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PHC3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PHC3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PHC3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PHC3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PHC3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PHC3の機能に不可欠なPHC3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PHC3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PHC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPHC3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PHC3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PHC3 HDRプラスミド（h）および PHC3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPHC3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPHC3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。