Plasmide Double Nickase (h) Perlecan: sc-400823-NIC

HSPG2 code la perlecan, un grand protéoglycane à héparane sulfate des membranes basales et des matrices péricellulaires, qui se lie à des facteurs de croissance et à des composants structuraux de la matrice extracellulaire (MEC) afin de réguler l’architecture tissulaire. La perlecan module l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et la signalisation des morphogènes en organisant des gradients et des interactions de co‑récepteurs dans des voies telles que FGF, VEGF et TGF‑β, influençant l’angiogenèse, la chondrogenèse et les réponses aux lésions. Ses fonctions au sein de la MEC sont étroitement liées à l’intégrité vasculaire et à l’homéostasie du cartilage, et des altérations de l’expression ou de la structure de HSPG2 ont été associées à des troubles squelettiques congénitaux ainsi qu’au remodelage du microenvironnement tumoral, pertinent pour les études sur l’invasion et la signalisation stromale. En tant qu’organisateur de matrice, la perlecan est fréquemment étudiée dans des modèles de cellules endothéliales, de muscle lisse et de cellules stromales afin de disséquer les signaux extracellulaires qui contrôlent la prolifération et la migration.

Perlecan Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSPG2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSPG2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSPG2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSPG2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.