Perlecan Double Nickaseプラスミド (h): sc-400823-NIC

HSPG2は、基底膜および細胞周囲マトリックスに存在する大型ヘパラン硫酸プロテオグリカンであるペルレカンをコードしており、成長因子や構造的なECM（細胞外マトリックス）成分に結合して組織構築を制御します。ペルレカンは、FGF、VEGF、TGF-βなどの経路において濃度勾配の形成や共受容体相互作用を組織化することで、細胞接着、メカノトランスダクション、モルフォゲンシグナルを調節し、血管新生、軟骨形成、創傷応答に影響を与えます。こうした細胞外マトリックス機能は血管の健全性や軟骨の恒常性と密接に結びついており、HSPG2の発現量や構造の変化は、先天性骨格疾患や、浸潤および間質シグナル研究に関連する腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられています。マトリックスのオーガナイザーとして、ペルレカンは内皮細胞、平滑筋細胞、間質細胞のモデルでしばしば解析され、増殖や遊走を制御する細胞外シグナルを解明するために用いられます。

Perlecan ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HSPG2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HSPG2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HSPG2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HSPG2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。