Pericentrin 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403161-ACT

NUP85は核膜孔複合体（NPC）のNup107–160サブ複合体を構成する中核因子の一つをコードし、核—細胞質間輸送を支えるとともに、細胞周期を通じて核膜の構造維持に寄与します。NPCの組み立て、有糸分裂の進行、ゲノム安定性に関わる機能を介して、NUP85はシグナル伝達メディエーターや細胞周期因子の核内移行／核外輸送を制御し、転写プログラムに影響を与えます。核膜孔構成要素の破綻は、さまざまな疾患状況においてRNAプロセシング異常、ストレス応答の不全、異常増殖と関連づけられており、NUP85は輸送と連動した細胞生理の制御を研究するうえで有用な切り口となります。ヒト細胞モデルでは、NUP85活性の変化が核内輸送、チェックポイント制御、ならびに下流経路の再配線に及ぼす影響を解析できます。

Pericentrin 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUP85の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Pericentrin 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUP85 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUP85転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Pericentrin 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUP85遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPericentrin 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUP85発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPericentrin 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。