Plasmide CRISPR d'Activation (h) PCGF6: sc-404420-ACT

PCGF6 (polycomb group ring finger 6) est une protéine du groupe Polycomb contenant un motif « RING finger » qui participe à la répression transcriptionnelle épigénétique via des assemblages non canoniques du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1). En s’associant à RNF2/RING1B et à des facteurs apparentés, PCGF6 contribue à la monoubiquitinylation de la lysine 119 de l’histone H2A (H2AK119ub), à la compaction de la chromatine et au contrôle coordonné de programmes d’expression génique qui régissent le maintien des cellules souches, la différenciation et la progression du cycle cellulaire. Les réseaux de régulation liés à PCGF6 recoupent des voies impliquées dans le silençage des gènes du développement et la stabilité du génome, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des états de chromatine dérégulés observés dans divers contextes de cancérologie et de biologie du développement. Une activité altérée de PCGF6 a été associée à des modifications de la plasticité transcriptionnelle et à des signatures géniques liées à la prolifération, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique.

PCGF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PCGF6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PCGF6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PCGF6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PCGF6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PCGF6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PCGF6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PCGF6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PCGF6 dans les cellules tumorales présentant une expression de PCGF6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.