PCGF6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404420-ACT

PCGF6 (polycomb group ring finger 6) é uma proteína do grupo Polycomb que contém um domínio RING finger e participa da repressão transcricional epigenética por meio de montagens não canônicas do complexo repressivo Polycomb 1 (PRC1). Ao atuar em parceria com RNF2/RING1B e fatores relacionados, a PCGF6 contribui para a monoubiquitinação da histona H2A na lisina 119 (H2AK119ub), a compactação da cromatina e o controle coordenado de programas de expressão gênica que regulam a manutenção de células-tronco, a diferenciação e a progressão do ciclo celular. As redes regulatórias ligadas à PCGF6 se cruzam com vias que controlam o silenciamento de genes do desenvolvimento e a estabilidade do genoma, tornando-a relevante para o estudo de estados de cromatina desregulados observados em diversos contextos de câncer e biologia do desenvolvimento. Alterações na atividade de PCGF6 têm sido associadas a mudanças na plasticidade transcricional e em assinaturas gênicas relacionadas à proliferação, apoiando seu uso como um nó para estudos mecanísticos do controle epigenético.

PCGF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCGF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCGF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCGF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCGF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCGF6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCGF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCGF6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCGF6 em células tumorais com expressão de PCGF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.