PCDH8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405324-ACT

PCDH8 (protocaderina 8) é uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio da superfamília das caderinas, que contribui para a arquitetura tecidual e a sinalização intercelular em células humanas. Ao modular a dinâmica de adesão e a comunicação dependente de contato, a PCDH8 influencia processos como polaridade celular, migração e diferenciação, com efeitos a jusante sobre a organização do citoesqueleto e a remodelação das junções. Padrões desregulados de expressão de protocaderinas têm sido associados a alterações de adesão e fenótipos invasivos na biologia do câncer, e a PCDH8 é frequentemente investigada no contexto da regulação epigenética e do controle transcricional. Como parte de redes mais amplas de caderinas/protocaderinas, a PCDH8 fornece um nó acessível para dissecar mecanismos que acoplam a adesão na superfície celular a programas de regulação gênica.

PCDH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PCDH8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PCDH8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PCDH8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PCDH8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PCDH8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PCDH8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PCDH8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PCDH8 em células tumorais com expressão de PCDH8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.