Plasmide Double Nickase (h) PCAF: sc-400753-NIC

KAT2B code l’histone acétyltransférase PCAF, un coactivateur de la famille GNAT qui acétyle les histones et des substrats non histoniques afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. PCAF participe au contrôle de la transcription par ses interactions avec des complexes multiprotéiques et des facteurs de transcription, influençant des processus tels que la réponse aux dommages de l’ADN, la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la signalisation du stress. En modulant l’expression génique dépendante de l’acétylation, PCAF contribue à des voies fréquemment altérées dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par une dérégulation épigénétique. Le PCAF humain constitue donc un nœud utile pour des études mécanistiques reliant le remodelage de la chromatine à des sorties transcriptionnelles spécifiques au contexte.

PCAF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KAT2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KAT2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KAT2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KAT2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.