Pax-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422115

概要

マウスPax2は、器官形成の過程で遺伝子発現プログラムを制御するパイアードボックス型転写因子であるPax-2をコードしており、特に発生期の腎臓、視神経／網膜、内耳で重要な役割を担います。Pax-2は、発生に関わる転写ネットワークを協調的に統括し、WNTやNotchシグナル伝達などの経路とのクロストークを介して、系譜の特定（lineage specification）や上皮分化を制御します。PAX2活性の異常は、腎・尿路先天異常や眼の発生異常と関連しているため、Pax2は発生研究および疾患モデル研究において広く用いられるマーカーであり、機序解明の要となる分子でもあります。細胞系では、Pax-2はDNAへの直接結合と転写抑制／活性化複合体を通じて、増殖、形態形成、組織特異的アイデンティティの維持に影響を与えます。

Pax-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPax2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pax2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pax2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pax-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pax-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pax2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pax-2の機能に不可欠なPax2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pax2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pax-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPax-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pax2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pax-2 HDRプラスミド（m）および Pax-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPax2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPax2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。