PARP1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400046-LAC

PARP1 kodiert die Poly(ADP-Ribose)-Polymerase 1, ein nukleäres Enzym, das DNA-Einzelstrangbrüche erkennt und die Poly(ADP-ribosyl)ierung von sich selbst sowie von chromatinassoziierten Proteinen katalysiert, um die Signalweiterleitung bei DNA-Schäden zu koordinieren. Über Interaktionen mit XRCC1 und weiteren Reparaturfaktoren reguliert PARP1 die Basenexzisionsreparatur, die Stabilität von Replikationsgabeln und das Chromatin-Remodeling und beeinflusst zudem die transkriptionelle Kontrolle sowie inflammatorische Signalwege. Die PARP1-Aktivität ist in ATM/ATR-abhängige Stressantworten eingebunden und kann nach genotoxischem Stress den Zellzyklusverlauf und Entscheidungen über das Zellschicksal modulieren. Eine fehlregulierte PARP1-Expression oder -Aktivität wurde mit genomischer Instabilität und krankheitsassoziierten Phänotypen in der Krebsbiologie und der Neurodegenerationsforschung in Verbindung gebracht.

PARP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PARP1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PARP1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PARP1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PARP1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PARP1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.