PAR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401719-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PAR-4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PAR-4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase PAR-4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para F2RL3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PAR-4 Anticorpo (5F4): sc-293206
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PAR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-401719-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAR-4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-401719-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
F2RL3 codifica o receptor ativado por protease-4 (PAR-4), um GPCR responsivo à trombina que é ativado por clivagem proteolítica, a qual expõe um ligante “ancorado” (tethered ligand), iniciando a sinalização por meio de Gq/11 e G12/13. O engajamento de PAR-4 promove mobilização de cálcio dependente de fosfolipase C, ativação de PKC e remodelamento do citoesqueleto mediado por RhoA, integrando-se às vias MAPK/ERK para regular a ativação plaquetária, a secreção de grânulos e a estabilização do trombo. Além da hemostasia, a atividade de F2RL3/PAR-4 contribui para a sinalização inflamatória em contextos vasculares e imunológicos e tem sido investigada na biologia de doenças cardiometabólicas e vasculares, incluindo processos relacionados à aterosclerose. Seus padrões de expressão e dinâmica de sinalização também oferecem um ponto de entrada mecanístico para estudar a interação entre proteases e GPCRs e a inflamação ligada à coagulação em modelos celulares humanos relevantes.
PAR-4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus F2RL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de F2RL3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função F2RL3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com F2RL3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.