Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pancreatic Polypeptide (m): sc-422391

Présentation

Le gène murin **Ppy** code le polypeptide pancréatique, une hormone peptidique produite par les cellules PP (γ) du pancréas, qui module la motilité gastro-intestinale, la contraction de la vésicule biliaire et la sécrétion exocrine pancréatique, tout en influençant l’appétit et l’homéostasie énergétique. En signalant via des membres de la famille des récepteurs du neuropeptide Y, le polypeptide pancréatique intègre les informations du système nerveux autonome et la détection des nutriments afin de coordonner les réponses digestives et métaboliques. Une altération de la fonction des cellules PP et de la dynamique du polypeptide pancréatique a été associée à une dérégulation du métabolisme du glucose, à des phénotypes liés à l’obésité et au remodelage endocrinien du pancréas dans des modèles de stress métabolique. **Ppy** est donc largement utilisé comme marqueur de l’identité des cellules PP et comme point d’entrée pour étudier l’hétérogénéité des cellules des îlots et la communication intestin–pancréas.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pancreatic Polypeptide (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppy dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppy, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppy à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pancreatic Polypeptide.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppy pour l'étude de la signalisation de Pancreatic Polypeptide, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppy essentiels à la fonction de Pancreatic Polypeptide
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppy pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pancreatic Polypeptide plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pancreatic Polypeptide plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppy. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pancreatic Polypeptide plasmide HDR (m) et le Pancreatic Polypeptide (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppy pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppy définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.