Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422391

概要

マウスPpyは膵ポリペプチド（pancreatic polypeptide）をコードする。このペプチドホルモンは膵臓のPP（γ）細胞で産生され、消化管運動、胆嚢収縮、膵外分泌を調節するとともに、食欲およびエネルギーホメオスタシスにも影響を及ぼす。膵ポリペプチドはニューロペプチドY受容体（NPY受容体）ファミリーを介したシグナル伝達により、自律神経からの入力と栄養感知を統合し、消化・代謝応答の協調を担う。代謝ストレスモデルでは、PP細胞機能や膵ポリペプチド動態の変化が、糖代謝の破綻、肥満関連表現型、ならびに膵内分泌のリモデリングと関連することが示されている。そのためPpyは、PP細胞アイデンティティのマーカーとして広く用いられると同時に、膵島細胞の不均一性や腸—膵コミュニケーションを研究するための重要な結節点でもある。

Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpy遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppy内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppyのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Pancreatic Polypeptideタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Pancreatic Polypeptideシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppy欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Pancreatic Polypeptideの機能に不可欠なPpyエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppyゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Pancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPancreatic Polypeptide CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppy遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Pancreatic Polypeptide HDRプラスミド（m）および Pancreatic Polypeptide HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpyホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpy標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。