PAM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422110

概要

ペプチジルグリシンα-アミド化モノオキシゲナーゼ（PAM）は、マウスのPam遺伝子にコードされる二機能性酵素で、多くの神経ペプチドおよびペプチドホルモンのC末端アミド化を触媒します。この修飾は、これらペプチドが完全な生物活性を発揮するために必要です。この銅およびアスコルビン酸依存性の経路は、分泌経路内でのペプチド成熟を支えるとともに、神経内分泌細胞や神経細胞における調節性分泌に影響を与えます。Pamの活性は、小胞の形成や分泌顆粒の機能を、シナプス伝達、ストレス応答、代謝、心血管恒常性を調節する神経ペプチドシグナル伝達ネットワークと結び付けます。ペプチドのアミド化の破綻やPAM機能の変化は、神経発達および神経精神疾患様の表現型、内分泌バランスの乱れ、ならびに心代謝形質と関連することが報告されており、Pamは分泌経路の生物学を機構的に研究するうえで有用な遺伝子座です。

PAM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPam遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pam内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pamのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PAMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PAMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pam欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PAMの機能に不可欠なPamエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pamゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PAM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPAM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pam遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PAM HDRプラスミド（m）および PAM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPamホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPam標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。