Plasmide CRISPR/Cas9 KO PALM2-AKAP2 (h): sc-407117

Présentation

PALM2-AKAP2 est un gène de fusion humain qui donne naissance à une protéine chimérique combinant des caractéristiques de la paralemmin-2 (PALM2), une phosphoprotéine associée à la membrane impliquée dans le remodelage de l’actine et l’extension des neurites, avec la protéine d’ancrage de la protéine kinase A 2 (AKAP2), une protéine échafaudage qui organise spatialement la signalisation de la protéine kinase A (PKA) dépendante de l’AMPc. En arrimant des activités kinases et phosphatases à des microdomaines subcellulaires définis, PALM2-AKAP2 est susceptible d’influencer la signalisation AMPc/PKA compartimentée, la dynamique du cytosquelette et le trafic membranaire. Une expression altérée ou un réarrangement impliquant ce locus a été étudié dans le contexte d’une signalisation dérégulée et de modifications de l’architecture cellulaire pertinentes pour la biologie du cancer et les processus neurodéveloppementaux. En tant que nœud de signalisation lié à une protéine échafaudage, il constitue un outil utile pour étudier comment une signalisation kinase localisée s’intègre aux programmes d’adhérence, de motilité et de morphologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PALM2-AKAP2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PALM2-AKAP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PALM2-AKAP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PALM2-AKAP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PALM2-AKAP2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PALM2-AKAP2 pour l'étude de la signalisation de PALM2-AKAP2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PALM2-AKAP2 essentiels à la fonction de PALM2-AKAP2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PALM2-AKAP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PALM2-AKAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PALM2-AKAP2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PALM2-AKAP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PALM2-AKAP2 plasmide HDR (h) et le PALM2-AKAP2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PALM2-AKAP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PALM2-AKAP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.