PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407117

概要

PALM2-AKAP2はヒトの融合遺伝子であり、アクチンの再構築や神経突起伸長に関与するとされる膜結合性リン酸化タンパク質パラレミン-2（PALM2）の特徴と、cAMP依存性プロテインキナーゼA（PKA）シグナル伝達を空間的に組織化する足場タンパク質A-kinase anchoring protein 2（AKAP2）の特徴を併せ持つキメラタンパク質を生じます。キナーゼおよびホスファターゼ活性を特定の細胞内マイクロドメインに係留することで、PALM2-AKAP2は区画化されたcAMP/PKAシグナル伝達、細胞骨格ダイナミクス、ならびに膜輸送に影響を与えうる位置づけにあります。この座位に関わる発現変化や再構成は、がん生物学や神経発生過程に関連する、シグナル伝達の破綻や細胞構築の変化という観点から検討されてきました。足場タンパク質に結び付いたシグナル伝達ノードとして、局在化したキナーゼシグナルが接着・運動性・形態制御プログラムとどのように統合されるかを研究するうえで有用です。

PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPALM2-AKAP2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PALM2-AKAP2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PALM2-AKAP2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PALM2-AKAP2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PALM2-AKAP2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PALM2-AKAP2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PALM2-AKAP2の機能に不可欠なPALM2-AKAP2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PALM2-AKAP2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPALM2-AKAP2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PALM2-AKAP2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PALM2-AKAP2 HDRプラスミド（h）および PALM2-AKAP2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPALM2-AKAP2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPALM2-AKAP2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。