Plasmide Double Nickase (h) PAcP: sc-405118-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PAcP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PAcP Double Nickase (h) et le plasmide PAcP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACPP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: PAcP Antibody (PAP-1): sc-69858
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PAcP | sc-405118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PAcP | sc-405118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACPP code la phosphatase acide prostatique (PAcP), une phosphatase acide sécrétée et intracellulaire qui hydrolyse les monoesters du phosphate et peut agir comme une phosphatase des tyrosines protéiques dans les cellules épithéliales de la prostate. L’activité de la PAcP influence les voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation ainsi que les programmes de différenciation cellulaire, avec des liens rapportés aux voies des récepteurs de facteurs de croissance et aux voies sensibles aux androgènes qui façonnent l’homéostasie des cellules prostatiques. Des modifications de l’expression d’ACPP et de la fonction enzymatique de la PAcP ont été étudiées dans le contexte de la biologie du cancer de la prostate, notamment en ce qui concerne des changements de la signalisation et du phénotype des cellules tumorales. En tant que marqueur enrichi dans la prostate et relié mécaniquement à la régulation par phosphorylation, ACPP est fréquemment utilisé pour explorer l’identité de lignée, le contrôle de la signalisation et le remodelage de voies associé au cancer.
PAcP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACPP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACPP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACPP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACPP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.