P2X3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402380-ACT

ヒトP2RX3はP2X3受容体をコードしており、これはATPによって開口するカチオンチャネルです。P2X3は末梢感覚ニューロンに高発現しており、細胞外ヌクレオチドに応答して速やかな脱分極電流とカルシウム流入を媒介します。P2X3はプリン作動性神経伝達に関与し、炎症や組織損傷のシグナルを統合することで、細胞外ATP放出を神経興奮性、神経原性炎症、ならびに感覚経路におけるシナプス性コミュニケーションへと結び付けます。P2X3シグナルの破綻は、侵害受容処理の変化や感覚過敏の表現型と関連することが示されており、P2RX3は刺激誘発性の神経活動化や痛み関連回路機構を研究するうえで有用な標的です。これらの生物学的特性は、MAPK、カルシウム依存性転写、サイトカインによる感覚ニューロン機能の調節へと収束する、より広範なイオンチャネルおよびGPCR近傍のシグナル伝達ネットワークとも関連しています。

P2X3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性P2RX3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

P2X3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における P2RX3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はP2RX3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性P2X3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のP2RX3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるP2X3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびP2RX3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるP2X3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。