p22-phox CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400325

概要

CYBAはp22-phoxをコードしており、p22-phoxは食細胞NADPHオキシダーゼ（NOX2）複合体の必須膜サブユニットである。gp91-phox/NOX2を安定化し、ファゴソーム膜および細胞膜上で活性型オキシダーゼが組み立てられるのを支える。p22-phoxは分子状酸素への電子移動を可能にすることで、抗菌防御および自然免疫細胞におけるレドックス依存的シグナル伝達に寄与する、制御された活性酸素種（ROS）産生に必須である。CYBA依存的なROSは、貪食、炎症性メディエーター産生、ならびに酸化バーストの動態に関連する経路に影響を与える。CYBAの遺伝学的破綻または発現変動はNOX活性の低下と関連し、慢性肉芽腫症様の表現型、炎症制御の破綻、酸化ストレス関連の細胞応答といった文脈で研究されている。

p22-phox CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYBA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYBA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYBAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、p22-phoxタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、p22-phoxシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYBA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• p22-phoxの機能に不可欠なCYBAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYBAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• p22-phox CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびp22-phox CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYBA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  p22-phox HDRプラスミド（h）および p22-phox HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYBAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYBA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。