p19 INK4D/CDKN2D Double Nickaseプラスミド (h): sc-401761-NIC

CDKN2Dはp19 INK4Dをコードする。p19 INK4Dはサイクリン依存性キナーゼ（CDK）阻害因子であり、CDK4およびCDK6に選択的に結合して、サイクリンD依存的なRB1のリン酸化を抑制し、G1/Sチェックポイントを維持する。E2F駆動性転写を制限することで、p19 INK4Dは増殖抑制シグナルを細胞周期からの離脱や分化プログラム（造血系および神経系系譜を含む）と統合する。CDKN2Dの機能は、有糸分裂促進性のRAS–MAPKシグナル伝達や、CDK活性とチェックポイント制御に収束するストレス応答性経路とも交差する。INK4ファミリーおよびRB経路構成因子の制御異常は、疾患関連の細胞モデルにおける増殖制御の破綻にしばしば関与しており、そのためCDKN2Dは細胞周期制御と増殖抑制機構を研究するうえで有用なノードとなる。

p19 INK4D/CDKN2D ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDKN2D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDKN2D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDKN2Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDKN2Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。