p120 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400943-ACT

CTNND1はp120カテニン（p120）をコードしており、p120はアーマジロリピートをもつタンパク質で、古典的カドヘリンの膜近傍（juxtamembrane）領域に結合します。p120はカドヘリンのエンドサイトーシスとターンオーバーを抑えることで、接着結合（adherens junction）を安定化します。さらに、カドヘリン–カテニン複合体とRhoファミリーGTPaseシグナル伝達を協調させることで、p120はアクチン細胞骨格のダイナミクス、上皮極性、接触依存的な増殖制御に影響し、細胞移動や組織形態形成を制御する経路とも交差します。CTNND1の発現変化やp120の局在異常は、がんモデルにおいて細胞間接着プログラムの破綻や浸潤性表現型と関連づけられており、CTNND1の機能攪乱は、頭蓋顔面および上皮の生物学に影響する発生異常の文脈でも研究されています。

p120 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CTNND1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

p120 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CTNND1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCTNND1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性p120の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCTNND1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるp120依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCTNND1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるp120経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。