Plasmide CRISPR d'Activation (h) P-cadherin: sc-400507-ACT

CDH3 code la P-cadhérine, une cadhérine classique qui assure une adhésion cellule–cellule dépendante du calcium au niveau des jonctions d’adhérence et régule l’architecture des tissus épithéliaux. Grâce à des interactions homophiles et à son couplage aux caténines et au cytosquelette d’actine, la P-cadhérine influence la polarité cellulaire, la migration collective et la stabilité jonctionnelle, en s’articulant avec des voies telles que la signalisation Wnt/β-caténine et la plasticité épithélio-mésenchymateuse. Une expression dérégulée de CDH3 est associée à des dynamiques d’adhésion altérées et à des phénotypes invasifs dans de nombreux cancers épithéliaux, et des variants germinaux ont été reliés à des troubles du développement touchant les tissus ectodermiques et la vision. Ces propriétés font de CDH3 un nœud pertinent pour étudier la signalisation dépendante de l’adhésion, la morphogenèse tissulaire et des comportements de type métastatique dans des modèles cellulaires humains.

P-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDH3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

P-cadherin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDH3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDH3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de P-cadherin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDH3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de P-cadherin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie P-cadherin dans les cellules tumorales présentant une expression de CDH3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.