OTC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402611-ACT

オルニチントランスカルバミラーゼ（OTC）はミトコンドリア酵素で、オルニチンとカルバモイルリン酸をシトルリンへ変換する反応を触媒します。これは、アンモニア解毒を担う肝臓の尿素回路における中核的なステップです。OTC活性は窒素の排出を調節することで、細胞内の窒素バランス、ミトコンドリア代謝、アミノ酸恒常性に影響を与え、その下流で酸化ストレスや生体エネルギー状態にも波及します。OTCの機能異常は高アンモニア血症や先天性代謝異常と関連しており、尿素回路フラックスの変化は代謝の再配線やミトコンドリア機能障害といった文脈でも研究されています。そのためヒトOTCは、肝細胞および肝臓関連モデル系において、尿素回路の制御、窒素処理、ならびにミトコンドリア関連ストレス応答を解析するうえで有用な標的（ノード）となります。

OTC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性OTCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OTC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における OTC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOTC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OTCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOTC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOTC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOTC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOTC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。