OSR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406034-ACT

O OSR1 humano (odd-skipped related transcription factor 1) codifica uma proteína de ligação ao DNA do tipo “zinc finger” que regula decisões de destino celular e programas de padronização durante o desenvolvimento embrionário, com papéis proeminentes na especificação do mesoderma intermediário e na organogênese. O OSR1 atua como um regulador transcricional que se integra a redes gênicas dirigidas por morfógenos, incluindo vias influenciadas pela sinalização WNT e BMP, para controlar diferenciação, migração e morfogênese tecidual. Alterações na expressão de OSR1 têm sido associadas a anomalias do desenvolvimento e a programas de linhagem desregulados em contextos relevantes para doenças, tornando-o um nó útil para o estudo do controle transcricional da identidade celular. In vitro, o OSR1 é comumente investigado em modelos de diferenciação epitelial e desenvolvimento de organoides, nos quais a dosagem de fatores de transcrição pode remodelar circuitos regulatórios.

OSR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OSR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OSR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OSR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OSR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OSR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OSR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OSR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OSR1 em células tumorais com expressão de OSR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.