OPN1SW Double Nickaseプラスミド (h): sc-400755-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- OPN1SW Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- OPN1SWダブルニカースプラスミド（h）およびOPN1SWダブルニカースプラスミド（h2）は、OPN1SWを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
OPN1SW Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400755-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OPN1SW Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400755-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPN1SWは短波長感受性オプシン1をコードしており、これは11-シス-レチナールと結合して、網膜錐体外節における青色光感受性の視物質を形成する錐体光色素です。光子を吸収すると、OPN1SWはトランスデューシンおよびホスホジエステラーゼのシグナル伝達を介して錐体の光受容（フォトトランスダクション）カスケードを活性化し、cGMPを低下させることで環状ヌクレオチド作動性チャネルを調節し、膜の過分極を形成します。この経路は、外節への輸送、発色団の再生、光順応の過程とも連携しており、網膜色素上皮による支持のもとで協調的に制御されています。OPN1SWの機能に影響する遺伝的多様性や制御異常は、錐体の分光感度の差異と関連づけられており、遺伝性網膜疾患研究において重要となる色覚表現型に寄与し得ます。
OPN1SW ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における OPN1SW 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、OPN1SW内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、OPN1SWの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、OPN1SWが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。