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Olfr666慢病毒激活颗粒(m) | sc-435166-LAC | 200 µl | $455.00 |
Olfr666 在小鼠中编码一种嗅觉受体,属于庞大的 G 蛋白偶联受体(GPCR)超家族,可识别气味配体并启动感觉信号转导。嗅觉受体被激活后,通常与 G 蛋白偶联以刺激腺苷酸环化酶,升高 cAMP,并开启环核苷酸依赖性离子通道,将化学刺激转化为神经元活动。尽管嗅觉受体经典上与嗅觉感觉神经元相关,但已有研究报道部分嗅觉受体在非嗅觉组织中也存在异位表达,这推动了对“嗅觉之外”的 GPCR 信号转导的研究。GPCR 介导通路的失调与神经生物学及细胞稳态广泛相关,因此有理由在感觉与信号转导模型中考察 Olfr666 的表达与功能。
Olfr666 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Olfr666 表达。
Olfr666 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Olfr666转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Olfr666表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Olfr666 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。