OBSL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407284-ACT

OBSL1 (proteína 1 semelhante à obscurina) codifica uma grande proteína adaptadora do citoesqueleto que se associa à rede actina–miosina e contribui para a organização estrutural intracelular e para a mecanotransdução. Está implicada na manutenção da forma celular, na dinâmica de adesão e nos processos de remodelação do citoesqueleto que influenciam a migração e a integridade dos tecidos. A OBSL1 participa em redes de interações proteína–proteína que coordenam a sinalização e a montagem de “scaffolds”, ligando a arquitetura do citoesqueleto a vias regulatórias mais amplas que controlam o crescimento e a diferenciação. A disrupção genética de OBSL1 está associada à síndrome 3M e a fenótipos de crescimento relacionados, tornando-a relevante para investigar mecanismos de desenvolvimento ligados ao citoesqueleto e respostas celulares ao stress associadas a doença.

OBSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OBSL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OBSL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OBSL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OBSL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OBSL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OBSL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OBSL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OBSL1 em células tumorais com expressão de OBSL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.