OAT3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422696
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- OAT3 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico OAT3, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:OAT3 Anticorpo (3C11): sc-293264
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
OAT3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422696 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc22a8 codifica o transportador de ânions orgânicos 3 (OAT3), um transportador de captação basolateral poliespecífico que medeia a importação celular de diversos metabólitos endógenos e ânions orgânicos xenobióticos. No túbulo proximal renal de camundongos, o OAT3 sustenta a secreção vetorial ao acoplar a captação a partir do sangue a transportadores de efluxo apicais a jusante, moldando a depuração renal e a exposição sistêmica a muitas pequenas moléculas. Ao influenciar a troca de ânions orgânicos e o processamento intracelular de metabólitos, o OAT3 contribui para a homeostase de solutos e se relaciona com vias envolvidas no transporte tubular, na eliminação de toxinas urêmicas e na suscetibilidade à nefrotoxicidade. Alterações na atividade do OAT3 têm sido implicadas em mecanismos de lesão renal e na variabilidade farmacocinética, tornando o Slc22a8 um locus útil para modelar fenótipos dependentes de transportadores.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc22a8 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc22a8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc22a8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína OAT3.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc22a8 para a investigação da sinalização de OAT3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc22a8 críticos para a função OAT3
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc22a8 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo OAT3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo OAT3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc22a8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo OAT3 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR OAT3 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc22a8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc22a8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.