Particules Lentivirales d'Activation (h) Nur77: sc-418320-LAC

Le gène humain **NR4A1** code **Nur77**, un récepteur nucléaire orphelin de type gène de réponse immédiate, qui agit comme facteur de transcription sensible aux ligands en reliant des signaux dépendants des stimuli à des programmes rapides d’expression génique. Nur77 intègre des signaux issus des voies MAPK, NF-κB et dépendantes du calcium pour réguler l’activation et la tolérance immunitaires, l’apoptose et les réponses au stress mitochondrial, ainsi que l’adaptation métabolique. Dans les lymphocytes et les cellules myéloïdes, **NR4A1** influence les phénotypes d’anergie/d’épuisement des lymphocytes T et les réseaux de cytokines inflammatoires, tandis que dans d’autres contextes il module le contrôle du cycle cellulaire et la transcription induite par le stress. Une activité dérégulée de NR4A1/Nur77 a été associée à l’inflammation chronique, à l’auto-immunité et à des remaniements transcriptionnels liés au cancer, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques du couplage entre signalisation et transcription.

Les particules d'activation lentivirales Nur77 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NR4A1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Nur77 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NR4A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Nur77. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NR4A1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.