Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nup50 (h): sc-406550

Présentation

NUP50 code Nup50, un composant dynamique du complexe du pore nucléaire qui participe au transport nucléocytoplasmique en modulant le trafic et le recyclage, dans le noyau, de cargaisons dépendants d’importine‑α/β. Par ses interactions au niveau du panier nucléaire, Nup50 contribue à coordonner la cinétique d’import nucléaire avec des processus plus larges tels que la progression du cycle cellulaire, la régulation transcriptionnelle et le maintien de l’architecture nucléaire. La perturbation des voies de transport nucléaire et de l’homéostasie du complexe du pore nucléaire est fréquemment impliquée dans l’instabilité du génome et l’altération de programmes de signalisation pertinents pour la biologie du cancer et d’autres troubles caractérisés par une compartimentation nucléocytoplasmique déficiente. En conséquence, NUP50 est couramment étudié dans le contexte de la régulation du transport nucléaire, de la protéostasie et de la signalisation induite par le stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nup50 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NUP50 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NUP50, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NUP50 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nup50.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NUP50 pour l'étude de la signalisation de Nup50, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NUP50 essentiels à la fonction de Nup50
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NUP50 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nup50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nup50 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NUP50. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nup50 plasmide HDR (h) et le Nup50 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NUP50 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NUP50 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.