Nup37 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-409458-LAC

NUP37 codifica a Nup37, um componente central do subcomplexo Nup107–160 do complexo do poro nuclear, que sustenta a montagem do envelope nuclear e o transporte nucleocitoplasmático de proteínas e RNAs. Ao contribuir para a arquitetura do CPN, a Nup37 ajuda a coordenar a progressão do ciclo celular, eventos mitóticos e a regulação do genoma por meio do tráfego controlado de fatores de transcrição e mediadores de sinalização. Alterações na composição do poro nuclear são frequentemente associadas a mudanças na organização da cromatina e na sinalização de resposta ao estresse, tornando o NUP37 um ponto de partida útil para estudar a regulação da proliferação e da diferenciação dependente de transporte. Expressão desregulada ou dependência da função de nucleoporinas foi relatada em múltiplos contextos tumorais, apoiando pesquisas sobre vulnerabilidades do transporte nuclear e reprogramação de vias, sem implicar uso terapêutico.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nup37 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de NUP37 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Nup37 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição NUP37, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Nup37. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo NUP37 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.