Plasmide CRISPR d'Activation (h) NP2: sc-403815-ACT

NPTX2 code la pentraxine neuronale 2 (NP2), une protéine synaptique sécrétée impliquée dans le remodelage des synapses dépendant de l’activité et dans la maturation des circuits excitateurs. NP2 participe à des voies régulées par l’activité neuronale qui influencent le regroupement des récepteurs synaptiques et les interactions avec la matrice extracellulaire, soutenant des processus tels que la synaptogenèse, la plasticité et la stabilité des réseaux. Une expression altérée de NPTX2 a été associée à la biologie de maladies neurodégénératives et neuropsychiatriques, où le dysfonctionnement synaptique et la perturbation de l’équilibre excitation–inhibition constituent des caractéristiques fréquentes. En tant que marqueur moléculaire de l’activité neuronale et de l’intégrité synaptique, NP2 est largement étudiée dans des modèles de remodelage des circuits, de réponses au stress et de modifications synaptiques associées à l’inflammation.

NP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NPTX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NPTX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NPTX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NPTX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de NPTX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.